以下是生化实验中常用试剂的分类及用途总结,结合实验安全与操作要点,供实验参考:
一、基础化学试剂
1. 酸碱类试剂
盐酸(HCl)、氢氧化钠(NaOH)
作用 :调节溶液pH值,配制缓冲液。
应用 :细胞裂解液、酶反应体系的pH调控。
硫酸(H₂SO₄)、乙酸(CH₃COOH)
作用 :强酸/弱酸,用于沉淀蛋白、调节酸性环境。
应用 :蛋白质变性实验、DNA提取中的酸性条件设置。
2. 盐类试剂
氯化钠(NaCl)
作用 :维持渗透压,促进蛋白溶解或沉淀。
应用 :DNA提取中的盐溶液(如TE缓冲液含NaCl)、细胞培养液。
氯化钾(KCl)、氯化镁(MgCl₂)
作用 :提供离子环境,激活酶(如Mg²⁺是DNA聚合酶的辅因子)。
应用 :PCR反应体系、酶活性测定实验。
3. 有机溶剂
乙醇(Ethanol)、异丙醇(Isopropanol)
作用 :沉淀核酸、蛋白,固定细胞,消毒。
应用 :DNA/RNA提取中的沉淀步骤、实验器材消毒。
丙酮(Acetone)、二甲亚砜(DMSO)
作用 :溶解脂类、难溶性化合物(如DMSO溶解PCR引物)。
应用 :脂质提取、细胞冻存液(DMSO作为冻存保护剂)。
二、生物大分子研究试剂
1. 核酸相关试剂
Tris HCl缓冲液
作用 :维持核酸提取液的pH稳定(通常pH 7.5 8.5)。
应用 :DNA/RNA提取试剂盒、质粒纯化。
乙二胺四乙酸(EDTA)
作用 :螯合金属离子,抑制核酸酶活性。
应用 :DNA保存液、细胞裂解液(如TE缓冲液含EDTA)。
十二烷基硫酸钠(SDS)
作用 :强去污剂,裂解细胞并变性蛋白。
应用 :DNA提取中的细胞裂解、SDS PAGE凝胶电泳(分离蛋白)。
2. 蛋白质相关试剂
Tris HCl缓冲液(蛋白专用,pH 6.8 8.8)
作用 :维持蛋白溶液的pH,防止变性。
应用 :蛋白提取、Western blot实验。
苯甲基磺酰氟(PMSF)
作用 :丝氨酸蛋白酶抑制剂,防止蛋白降解。
应用 :蛋白提取过程中保护目标蛋白。
考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)
作用 :与蛋白结合显色,用于蛋白定量(Bradford法)或电泳染色。
应用 :蛋白浓度测定、SDS PAGE凝胶染色。
三、染色与检测试剂
1. 核酸染色剂
溴化乙锭(EB)
作用 :插入DNA双链,紫外下显荧光,用于电泳检测核酸。
注意 :强致癌物,现多被安全替代物(如SYBR Green、GoldView)取代。
甲基绿(Methyl Green)、派洛宁(Pyronin)
作用 :分别染色DNA(绿色)和RNA(红色),用于细胞内核酸定位。
应用 :组织切片或细胞涂片的核酸染色。
2. 蛋白染色剂
丽春红S(Ponceau S)
作用 :可逆性染色蛋白,用于Western blot中转膜效率验证。
应用 :膜上蛋白的快速可视化检测。
银染试剂(硝酸银、甲醛等)
作用 :高灵敏度染色蛋白,用于电泳后微量蛋白检测。
应用 :双向电泳(2 DE)后的蛋白图谱分析。
3. 细胞活性检测试剂
台盼蓝(Trypan Blue)
作用 :死细胞染色(活细胞拒染),用于细胞计数和存活率评估。
应用 :细胞培养中的 viability 检测。
MTT试剂(3 (4,5 二甲基噻唑 2) 2,5 二苯基四氮唑溴盐)
作用 :检测细胞代谢活性,活细胞线粒体酶将MTT还原为紫色甲臜。
应用 :细胞增殖或毒性实验(如药物筛选)。
四、缓冲液与溶液
1. 常用缓冲液
磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.2 7.4)
成分 :NaCl、KCl、Na₂HPO₄、KH₂PO₄
作用 :模拟生理渗透压,维持pH稳定,用于细胞洗涤、保存。
应用 :细胞培养、免疫组化实验。
Tris 盐酸缓冲液(Tris HCl,pH 6.8 8.8)
作用 :广泛用于核酸和蛋白实验的pH缓冲。
应用 :DNA提取、SDS PAGE凝胶配制(分离胶pH 8.8,浓缩胶pH 6.8)。
2. 特殊用途溶液
TE缓冲液(Tris EDTA,pH 8.0)
作用 :溶解并保存DNA,EDTA抑制核酸酶。
应用 :质粒DNA、基因组DNA的长期储存。
TAE/TBE缓冲液(用于核酸电泳)
成分 :Tris、乙酸/硼酸、EDTA
作用 :提供电泳电场环境,EDTA抑制核酸酶。
应用 :琼脂糖凝胶电泳分离DNA/RNA。
五、酶与辅酶类试剂
DNA聚合酶(如Taq酶、Pfu酶)
作用 :催化DNA链合成,用于PCR扩增。
应用 :基因克隆、突变检测。
限制性内切酶(如EcoRI、HindIII)
作用 :识别并切割特定DNA序列,用于基因工程。
应用 :质粒构建、DNA酶切分析。
辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)
作用 :酶联免疫吸附实验(ELISA)或Western blot中的信号放大。
应用 :抗原 抗体反应的显色检测(如DAB显色)。
六、安全与防护注意事项
1. 有毒试剂 :如EB、PMSF、DMSO需在通风橱操作,佩戴手套和护目镜。
2. 易燃易爆试剂 :乙醇、丙酮远离火源,密封保存。
3. 强酸强碱 :HCl、NaOH需小心操作,避免皮肤接触,用后及时盖紧瓶盖。
4. 生物危害 :涉及病毒、细菌的实验试剂需灭菌处理,按生物安全等级操作。