如何正确选用离子对试剂

离子对色谱由Gordon Schill博士于1973年建立，其方法是将离子性化合物添加到流动相中以促使离子与带电荷分析物形成配对离子。这些试剂由带有可离子化终端的烷基链组成。当在反相条件下用于常见的憎水性HPLC固定相时，离子对试剂可选择性的增加带电荷分析物的保留时间。

离子对试剂的选用步骤
1. 选择一根适合的色谱柱，常为C18柱；
2.准备流动相时仅使用HPLC级别的水和色谱级试剂；
3.选择能给出最佳分离度的流动相成分和浓度；
4.如果样品中有非离子化物质，在尝试离子化分离之前首先优化分离情况；
5.选择合适的离子对系列试剂以提供相应的离子配对：对于酸性分析物使用酸性离子对试剂；对于碱性分析物使用碱性离子对试剂；
用于酸性化合物：四丁基氢氧化铵（10%水溶液） 、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵
用于碱性化合物：戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠 、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠
6.通过比较选择所得分离度最好的离子对试剂；
7.一旦离子对试剂已经确定，调节流动相的pH值将分离度最大化；因为微小的pH值改变对保留性质和选择性都有较大的影响，所以仔细小心的小幅度调节pH值；
8.理想状况下，流动相中的离子对试剂浓度应为0.005M，但是稍微增加离子对试剂可能会稍微增加保留性质并因此优化分离情况。

离子对色谱法中的变量影响

离子对色谱法相比于普通反相色谱法，可以通过调节参数（包括pH、离子对试剂的类型和浓度、温度等）来满足分离度等要求。

1. 流动相的pH：在离子对方法中pH不仅影响分析物的离子化程度，也影响加入的离子对试剂的离子化进度而影响与分析物的离子对作用，因此pH的改变对分析物保留的影响更加复杂。

2. 温度：离子对方法中温度的改变会引起相对保留值发生显著性的变化。温度会改变色谱柱上吸附的离子对试剂的量，因此控制温度对分离特别重要。

3. 离子对试剂的类型和浓度：大多数情况下，固定相中离子对试剂的浓度会影响溶质的离子交换的保留行为，而离子对试剂的类型和浓度会直接影响其在固定相中的浓度。

*当想要获得一定的保留时，可以使用更低浓度的，疏水性更强的离子对试剂或者更高浓度的，疏水性更弱的离子对试剂。

*当固定相中的离子对试剂达到饱和时，继续增加离子对试剂的浓度反而会降低分析物的保留，因为离子对试剂的反离子浓度增加，加大与分析物的离子交换竞争。

*流动相的pH和离子对试剂的浓度的同时改变，则可以在很大程度上控制离子样品的保留范围和相对保留值。

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