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革兰氏染色法的操作步骤

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革兰氏染色法的操作步骤

分类:
行业新闻
2021/07/20 13:22
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【摘要】:
革兰氏染色法,是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法

革兰氏染色法的操作步骤

 

革兰氏染色法,是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法,属于复染法。

革兰氏染色法的染色原理:通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,再用95%乙醇脱色。


革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,未经染色的细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难区别。经染色后,阳性菌呈紫色,阴性菌呈红色,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,从而用以分类鉴定。

具体操作方法是:

(1)制片。
取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 
要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色;涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;火焰固定不宜过热(以玻片不烫手为宜)。 

(2)初染。
滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)染色1-2min,水洗。

(3)媒染。
用碘液冲去残水,并用碘液覆盖约1min,水洗。 

(4)脱色。
用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管流加95%的乙醇脱色,直至流出的乙醇无紫色时,立即水洗。 
乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节:脱色不足,阴性菌被误染成阳性菌;脱色过度,阳性菌被误染成阴性菌。因而脱色时间一般为20-30s。
 
(5)复染。
用番红液复染约2min,水洗。

(6)镜检。
干燥后,用油镜观察。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌,被染成红色的为革兰氏阴性菌。 


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